Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Через 1 час определяют состояние плазмы в каждой пробирке и устанавливают активность раствора гепарина - стандартного образца, при которой в пробирке, содержащей 0,5 мл раствора гепарина, происходит полное свертывание плазмы, а в другой пробирке, содержащей 0,72 мл этого раствора гепарина, плазма не свернулась. Выбранная активность обеспечивает наблюдение за влиянием испытуемого гепарина - стандартного образца на свертывание плазмы по истечении
часа. Обычно эта активность находится в пределах 1 - 1,5 ЕД для плазмы КРС и 1 -
3,5 ЕД для бараньей плазмы.
5. Приготовление раствора испытуемого препарата. Навеску препарата растворяют в растворе натрия хлорида изотоническом 0,9%, исходя из его предполагаемой активности с таким расчетом, чтобы 1 мл полученного раствора содержал столько же единиц гепарина, сколько содержит 1 мл раствора гепарина -стандартного образца. Раствор используют свежеприготовленным.
6. При необходимости разрешается сдвигать ряд пробирок, указанный в таблице, в сторону уменьшения концентрации раствора гепарина.
2.7.6. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВАКЦИНЫ ДИФТЕРИИ (АДСОРБИРОВАННОЙ)
Количественное определение вакцины дифтерии (адсорбированной) производят путем сравнения дозы вакцины, необходимой для защиты морских свинок от эффектов либо эритрогенной дозы вводимого интрадермально токсина дифтерии, либо летальной дозы вводимого подкожно токсина дифтерии, с дозой препарата сравнения, калиброванного в Международных Единицах, требующейся для получения такой же защиты.
За Международную Единицу принимают активность в установленном количестве Международного Стандарта, состоящего из дифтерийного анатоксина, адсорбированного на гидроксиде алюминия. Эквивалентность Международного Стандарта в Международных Единицах устанавливается Всемирной организацией здравоохранения.
В нижеописанном методе количественного определения используется модель параллельных линий с использованием трех разведений испытуемого и стандартного препаратов. Если аналитик обладает достаточно большим опытом работы с применением этого метода для данной вакцины, разрешается использовать упрощенную модель, включающую одно разведение для испытуемого и стандартного препаратов. Такая модель позволяет определять, обладает ли вакцина активностью, существенно превышающей необходимый минимум, но не дает информации о линейности и параллельности и кривой зависимости отклика от дозы. Упрощенная модель приводит к существенному уменьшению требуемого количества экспериментальных животных; она должна приниматься во внимание каждым аналитиком в соответствии с положениями Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях.
МЕТОД ИНТРАДЕРМАЛЬНОЙ ПРОВОКАЦИИ
Выбор и распределение испытуемых животных. В испытании используют здоровых белых морских свинок из одной партии размером, подходящим для предписанного количества точек введения. Разница в массе между самым тяжелым и самым легким животным не должна превышать 100 г. Морских свинок делят не менее чем на шесть равных групп; количество животных в группах должно быть достаточным для получения результатов, выдерживающих требования к достоверности определения, приведенные ниже. Если не было показано, что используемый токсин достаточно стабилен, или если он не был адекватным образом стандартизирован, используют пять морских свинок в качестве невакцинированного
контроля. Используют морских свинок одного пола; в иных случаях самцы и самки должны быть равномерно распределены по группам.
Выбор провокационного токсина. Препарат токсина дифтерии должен содержать от 67 до 133 lr/100 в 1 Lf и от 25000 до 50000 минимальных реактивных доз для кожи морских свинок в 1 Lf. Если было показано, что препарат токсина обладает стабильностью, проверка его активности перед каждым определением не является обязательной.
Приготовление раствора провокационного токсина. Непосредственно перед использованием провокационный токсин разбавляют подходящим растворителем с получением раствора провокационного токсина, содержащего около 0,0512 Lf в 0,2 мл. Из него путем дальнейших четырехкратных разведений получают ряд из пяти растворов, содержащих около 0,0128, 0,0032, 0,0008, 0,0002 и 0,00005 Lf в 0,2 мл.
Определение активности вакцины. Используя раствор натрия хлорида R концентрацией 9 г/л, готовят разведения испытуемой вакцины и препарата сравнения таким образом, чтобы для каждого из препаратов был получен ряд не более чем с 2,5-кратным различием между последовательными разведениями, и в котором промежуточные разведения при подкожном введении морской свинке в дозе
1,0 мл приводят в результате провокации к получению интрадермальной суммы, составляющей около 3. Каждое разведение назначают одной из групп морских свинок, каждой из которых вводят подкожно по 1,0 мл этого разведения. Через 28 дней каждой морской свинке обривают оба бока и вводят интрадермально по 0,2 мл каждого из шести разведений токсина в шесть различных точек на коже каждой из вакцинированных морских свинок таким образом, чтобы минимизировать помехи между соседними локализациями.
